Введение
При хроматографическом разделении биологические молекулы представляют собой уникальные проблемы из-за их структурной сложности, широкого диапазона молекулярных масс и чувствительности к условиям окружающей среды. От терапевтических пептидов и олигонуклеотидов до моноклональных антител и рекомбинантных белков — каждый класс биомолекул требует хроматографических методов, адаптированных к его специфическим физико-химическим свойствам.
Welch Materials предлагает полный портфель хроматографических решений, разработанных для удовлетворения разнообразных аналитических потребностей биологических образцов. В этой статье мы представляем наши хроматографические платформы для анализа биологических образцов, охватывающие эксклюзионную хроматографию (SEC), обращенно-фазовую жидкостную хроматографию (RPLC), хроматографию гидрофобных взаимодействий (HIC) и ионообменную хроматографию, а также их ключевые применения в анализе пептидов, нуклеиновых кислот, антител и белков.
Примечание: Эта статья представляет лишь некоторые из приложений из документа. Загрузите полный документ решения в конце статьи для получения дополнительных примеров применения.
Эксклюзионная хроматография
Подробнее: Снижение неспецифической адсорбции в эксклюзионной хроматографии с помощью Xtimate Bio SEC
Серия Xtimate Bio SEC является основным решением Welch Materials для SEC-анализа биообразцов. Ее стационарная фаза использует уникальную технологию модификации поверхности, полученную путем связывания гидрофильных высокомолекулярных полимеров с ультрачистой кремнеземной матрицей. Контролируемая химическая модификация обеспечивает надежную воспроизводимость между партиями. Гидрофильный полимер связывается равномерно и полностью, обеспечивая обширное покрытие поверхности кремнезема и минимизируя неспецифическую адсорбцию (НСА) биологических образцов, таких как белки.
Примеры применения
Анализ агрегатов моноклональных антител
- Колонка: Xtimate Bio SEC-300 (5 мкм, 4.6×300 мм)
- Подвижная фаза: 50 мМ фосфат + 300 мМ буфер NaCl
- Скорость потока: 0.2 мл/мин
- Длина волны детектора: 280 нм
- Температура колонки: 25 °C
- Объем инъекции: 10 мкл
Определение содержания рекомбинантного человеческого коллагена типа III
- Колонка: Xtimate Bio SEC-300 (5 мкм, 7.8×300 мм)
- Подвижная фаза: 0.1 моль/л раствор PB (pH 6.7)
- Скорость потока: 0.5 мл/мин
- Длина волны детектора: 205 нм
- Температура колонки: 30 °C
Анализ агрегата октреотида ацетата
- Колонка: Xtimate Bio SEC-300 (5 мкм, 7.8×300 мм)
- Подвижная фаза: ACN / вода / TFA = 20 / 80 / 0.036
- Скорость потока: 0.7 мл/мин
- Длина волны детектора: 210 нм
- Температура колонки: 35 °C
Обращенно-фазовая жидкостная хроматография
Ultisil и Xtimate — две основные серии колонок ВЭЖХ от Welch, с широким ассортиментом обращенно-фазовых и нормально-фазовых стационарных фаз на выбор.
Серия Ultisil использует полностью пористый сферический диоксид кремния в качестве матрицы, сочетая запатентованные технологии связывания стационарной фазы и обработки поверхности диоксида кремния. Эти колонки обеспечивают высокое разрешение, отличную форму пиков и низкую адсорбцию белков. Общие обращенно-фазовые связанные фазы Ultisil включают C18, C8, C4, C3 и т.д.
Серия Xtimate использует гибридную кремнеземную матрицу, способную выдерживать более жесткие аналитические условия. Она демонстрирует исключительную стабильность и долговечность при высоких температурах и экстремальных pH подвижных фазах. Процесс двойного концевого кэпирования минимизирует остаточную активность силанола, обеспечивая оптимальную форму пиков.
Примеры применения
Определение родственных веществ тимальфазина
- Колонка: Ultisil LP-C18 (5 мкм, 4.6×250 мм)
- Подвижная фаза: A) буфер (NH4)2SO4 / ACN = 90/10; B) буфер (NH4)2SO4 / ACN = 50/50
- Скорость потока: 0.8 мл/мин
- Длина волны детектора: 210 нм
- Температура колонки: 30 °C
- Объем инъекции: 20 мкл
- Концентрация образца: основное вещество 0.5 мг/мл; примеси 2.5 мкг/мл каждая
- Градиент:
Время (мин) A% B% 0 90 10 15 84 16 40 83 17 65 83 17 100 50 50 105 50 50 106 90 10 120 90 10
Анализ олигонуклеотида
- Колонка: Xtimate C18 (5 мкм, 4.6×250 мм)
- Подвижная фаза: A) PB / MeOH = 95/5; B) PB / MeOH = 75/25
- Скорость потока: 1.0 мл/мин
- Длина волны детектора: 260 нм
- Температура колонки: 25 °C
- Объем инъекции: 10 мкл
- Градиент:
Время (мин) A% B% 0 100 0 20 100 0 30 50 50 35 0 100 40 0 100
Определение чистоты человеческого Г-КСФ
- Колонка: Ultisil XB-C18 (5 мкм, 4.6×250 мм, 300 Å)
- Подвижная фаза: A) 0.1% TFA-вода; B) 0.1% TFA-ACN
- Скорость потока: 1.0 мл/мин
- Длина волны детектора: 214 нм
- Температура колонки: 30 °C
- Объем инъекции: 2 мкл
- Градиент:
Время (мин) А% В% 0 50 50 30 10 90 31 50 50 45 50 50
Определение лактоферрина
- Колонка: Xtimate C4 (3 мкм, 4,6×150 мм, 300 Å)
- Подвижная фаза: А) 0,1% ТФУ-вода; Б) 0,1% ТФУ-ацетонитрил
- Скорость потока: 1,0 мл/мин
- Длина волны детектора: 220 нм
- Температура колонки: 60 °C
- Объем инжекции: 10 мкл
- Градиент:
Время (мин) А% В% 0 85 15 15 50 50 15.1 5 95 18 5 95 18.1 85 15 25 85 15
Гидрофобная хроматография
Серия Advanchrom HIC от Welch Materials является ключевым инструментом для разделения конъюгатов антитело-препарат (ADCs) и анализа отношения лекарство-антитело (DAR). Advanchrom Bio HIC-Butyl — это высокоэффективная колонка, разработанная для разделения белков на основе гидрофобной хроматографии, использующая усовершенствованную макропористую силикатную матрицу в сочетании с уникальной технологией поверхностной связи. Advanchrom HIC-Butyl, в свою очередь, является идеальным выбором для антител, белков и ADCs с низкой гидрофобностью.
Примеры применения
DAR-анализ референсной формулы дизитамаба ведотина
- Колонка: Advanchrom Bio HIC-Butyl (4,6×100 мм, 5 мкм)
- Подвижная фаза: A) 50 мМ PB + 2,0 M (NH4)2SO4, pH 7,0; Б) 50 мМ PB, pH 7,0 / IPA = 75/25
- Скорость потока: 1,0 мл/мин
- Длина волны детектора: 280 нм
- Температура колонки: 30 °C
- Объем инжекции: 5 мкл
- Градиент:
Время (мин) А% В% 0 90 10 1 90 10 25 0 100 30 0 100
Анализ ритуксимаба
- Колонка: Advanchrom HIC-Butyl (4,6×50 мм, 3 мкм)
- Подвижная фаза: A) 1,0 М CH3COONH4; Б) 25 мМ CH3COONH4 / ACN = 70/30
- Скорость потока: 0,5 мл/мин
- Длина волны детектора: 280 нм
- Температура колонки: 30 °C
- Объем инжекции: 10 мкл
- Градиент:
Время (мин) А% В% 0 90 10 2 90 10 15 0 100 20 0 100
Ионообменная хроматография
Advanchrom SCX — это высокоэффективная сильнокатионообменная (SCX) колонка, основанная на передовых монодисперсных непористых полимерных микросферах и использующая запатентованную технологию поверхностной связи. Она специально разработана для разделения и характеристики вариантов заряда в моноклональных антителах (мАТ), биспецифических антителах (бсАТ), слитых белках и конъюгатах антитело-препарат (КАП).
Пример применения
Анализ варианта заряда моноклонального антитела NIST
- Колонка: Advanchrom SCX (4,6×150 мм, 5 мкм)
- Подвижная фаза: A) 20 мМ MES (pH 6,5); Б) 20 мМ MES (pH 6,5) + 0,5 M NaCl
- Скорость потока: 0,3 мл/мин
- Длина волны детектора: 280 нм
- Температура колонки: 30 °C
- Объем инжекции: 2 мкл
- Концентрация образца: 10 мг/мл
- Градиент:
Время (мин) А% В% 0 90 10 30 70 30