Welch Solution for Biological Sample Analysis

Решение Welch для анализа биологических образцов

Введение

При хроматографическом разделении биологические молекулы представляют собой уникальные проблемы из-за их структурной сложности, широкого диапазона молекулярных масс и чувствительности к условиям окружающей среды. От терапевтических пептидов и олигонуклеотидов до моноклональных антител и рекомбинантных белков — каждый класс биомолекул требует хроматографических методов, адаптированных к его специфическим физико-химическим свойствам.

Welch Materials предлагает полный портфель хроматографических решений, разработанных для удовлетворения разнообразных аналитических потребностей биологических образцов. В этой статье мы представляем наши хроматографические платформы для анализа биологических образцов, охватывающие эксклюзионную хроматографию (SEC), обращенно-фазовую жидкостную хроматографию (RPLC), хроматографию гидрофобных взаимодействий (HIC) и ионообменную хроматографию, а также их ключевые применения в анализе пептидов, нуклеиновых кислот, антител и белков.

Примечание: Эта статья представляет лишь некоторые из приложений из документа. Загрузите полный документ решения в конце статьи для получения дополнительных примеров применения.

Эксклюзионная хроматография

Серия Xtimate Bio SEC является основным решением Welch Materials для SEC-анализа биообразцов. Ее стационарная фаза использует уникальную технологию модификации поверхности, полученную путем связывания гидрофильных высокомолекулярных полимеров с ультрачистой кремнеземной матрицей. Контролируемая химическая модификация обеспечивает надежную воспроизводимость между партиями. Гидрофильный полимер связывается равномерно и полностью, обеспечивая обширное покрытие поверхности кремнезема и минимизируя неспецифическую адсорбцию (НСА) биологических образцов, таких как белки.

Примеры применения

Анализ агрегатов моноклональных антител

  • Колонка: Xtimate Bio SEC-300 (5 мкм, 4.6×300 мм)
  • Подвижная фаза: 50 мМ фосфат + 300 мМ буфер NaCl
  • Скорость потока: 0.2 мл/мин
  • Длина волны детектора: 280 нм
  • Температура колонки: 25 °C
  • Объем инъекции: 10 мкл
Chromatogram of monoclonal antibody aggregates

Определение содержания рекомбинантного человеческого коллагена типа III

  • Колонка: Xtimate Bio SEC-300 (5 мкм, 7.8×300 мм)
  • Подвижная фаза: 0.1 моль/л раствор PB (pH 6.7)
  • Скорость потока: 0.5 мл/мин
  • Длина волны детектора: 205 нм
  • Температура колонки: 30 °C
Chromatogram of recombinant type III humanized collagen

Анализ агрегата октреотида ацетата

  • Колонка: Xtimate Bio SEC-300 (5 мкм, 7.8×300 мм)
  • Подвижная фаза: ACN / вода / TFA = 20 / 80 / 0.036
  • Скорость потока: 0.7 мл/мин
  • Длина волны детектора: 210 нм
  • Температура колонки: 35 °C

Обращенно-фазовая жидкостная хроматография

Ultisil и Xtimate — две основные серии колонок ВЭЖХ от Welch, с широким ассортиментом обращенно-фазовых и нормально-фазовых стационарных фаз на выбор.

Серия Ultisil использует полностью пористый сферический диоксид кремния в качестве матрицы, сочетая запатентованные технологии связывания стационарной фазы и обработки поверхности диоксида кремния. Эти колонки обеспечивают высокое разрешение, отличную форму пиков и низкую адсорбцию белков. Общие обращенно-фазовые связанные фазы Ultisil включают C18, C8, C4, C3 и т.д.

Серия Xtimate использует гибридную кремнеземную матрицу, способную выдерживать более жесткие аналитические условия. Она демонстрирует исключительную стабильность и долговечность при высоких температурах и экстремальных pH подвижных фазах. Процесс двойного концевого кэпирования минимизирует остаточную активность силанола, обеспечивая оптимальную форму пиков.

Примеры применения

Определение родственных веществ тимальфазина

  • Колонка: Ultisil LP-C18 (5 мкм, 4.6×250 мм)
  • Подвижная фаза: A) буфер (NH4)2SO4 / ACN = 90/10; B) буфер (NH4)2SO4 / ACN = 50/50
  • Скорость потока: 0.8 мл/мин
  • Длина волны детектора: 210 нм
  • Температура колонки: 30 °C
  • Объем инъекции: 20 мкл
  • Концентрация образца: основное вещество 0.5 мг/мл; примеси 2.5 мкг/мл каждая
  • Градиент:
    Время (мин) A% B%
    0 90 10
    15 84 16
    40 83 17
    65 83 17
    100 50 50
    105 50 50
    106 90 10
    120 90 10
Chromatogram of thymalfasin related substances

Анализ олигонуклеотида

  • Колонка: Xtimate C18 (5 мкм, 4.6×250 мм)
  • Подвижная фаза: A) PB / MeOH = 95/5; B) PB / MeOH = 75/25
  • Скорость потока: 1.0 мл/мин
  • Длина волны детектора: 260 нм
  • Температура колонки: 25 °C
  • Объем инъекции: 10 мкл
  • Градиент:
    Время (мин) A% B%
    0 100 0
    20 100 0
    30 50 50
    35 0 100
    40 0 100
Chromatogram of oligonucleotide

Определение чистоты человеческого Г-КСФ

  • Колонка: Ultisil XB-C18 (5 мкм, 4.6×250 мм, 300 Å)
  • Подвижная фаза: A) 0.1% TFA-вода; B) 0.1% TFA-ACN
  • Скорость потока: 1.0 мл/мин
  • Длина волны детектора: 214 нм
  • Температура колонки: 30 °C
  • Объем инъекции: 2 мкл
  • Градиент:
    Время (мин) А% В%
    0 50 50
    30 10 90
    31 50 50
    45 50 50
Chromatogram of human G-CSF

Определение лактоферрина

  • Колонка: Xtimate C4 (3 мкм, 4,6×150 мм, 300 Å)
  • Подвижная фаза: А) 0,1% ТФУ-вода; Б) 0,1% ТФУ-ацетонитрил
  • Скорость потока: 1,0 мл/мин
  • Длина волны детектора: 220 нм
  • Температура колонки: 60 °C
  • Объем инжекции: 10 мкл
  • Градиент:
    Время (мин) А% В%
    0 85 15
    15 50 50
    15.1 5 95
    18 5 95
    18.1 85 15
    25 85 15
Chromatogram of lactoferrin

Гидрофобная хроматография

Серия Advanchrom HIC от Welch Materials является ключевым инструментом для разделения конъюгатов антитело-препарат (ADCs) и анализа отношения лекарство-антитело (DAR). Advanchrom Bio HIC-Butyl — это высокоэффективная колонка, разработанная для разделения белков на основе гидрофобной хроматографии, использующая усовершенствованную макропористую силикатную матрицу в сочетании с уникальной технологией поверхностной связи. Advanchrom HIC-Butyl, в свою очередь, является идеальным выбором для антител, белков и ADCs с низкой гидрофобностью.

Примеры применения

DAR-анализ референсной формулы дизитамаба ведотина

  • Колонка: Advanchrom Bio HIC-Butyl (4,6×100 мм, 5 мкм)
  • Подвижная фаза: A) 50 мМ PB + 2,0 M (NH4)2SO4, pH 7,0; Б) 50 мМ PB, pH 7,0 / IPA = 75/25
  • Скорость потока: 1,0 мл/мин
  • Длина волны детектора: 280 нм
  • Температура колонки: 30 °C
  • Объем инжекции: 5 мкл
  • Градиент:
    Время (мин) А% В%
    0 90 10
    1 90 10
    25 0 100
    30 0 100
Chromatogram of disitamab vedotin reference formulation

Анализ ритуксимаба

  • Колонка: Advanchrom HIC-Butyl (4,6×50 мм, 3 мкм)
  • Подвижная фаза: A) 1,0 М CH3COONH4; Б) 25 мМ CH3COONH4 / ACN = 70/30
  • Скорость потока: 0,5 мл/мин
  • Длина волны детектора: 280 нм
  • Температура колонки: 30 °C
  • Объем инжекции: 10 мкл
  • Градиент:
    Время (мин) А% В%
    0 90 10
    2 90 10
    15 0 100
    20 0 100
Chromatogram of rituximab

Ионообменная хроматография

Advanchrom SCX — это высокоэффективная сильнокатионообменная (SCX) колонка, основанная на передовых монодисперсных непористых полимерных микросферах и использующая запатентованную технологию поверхностной связи. Она специально разработана для разделения и характеристики вариантов заряда в моноклональных антителах (мАТ), биспецифических антителах (бсАТ), слитых белках и конъюгатах антитело-препарат (КАП).

Пример применения

Анализ варианта заряда моноклонального антитела NIST

  • Колонка: Advanchrom SCX (4,6×150 мм, 5 мкм)
  • Подвижная фаза: A) 20 мМ MES (pH 6,5); Б) 20 мМ MES (pH 6,5) + 0,5 M NaCl
  • Скорость потока: 0,3 мл/мин
  • Длина волны детектора: 280 нм
  • Температура колонки: 30 °C
  • Объем инжекции: 2 мкл
  • Концентрация образца: 10 мг/мл
  • Градиент:
    Время (мин) А% В%
    0 90 10
    30 70 30