Во Всемирный день шоколада: Анализ ЭДТА динатрия в шоколаде методом ВЭЖХ
Введение
Шоколад — одно из самых широко употребляемых сладких кондитерских изделий на Земле, им наслаждаются представители самых разных демографических групп и культур благодаря его уникальным вкусовым качествам. От элитного темного шоколада до молочного шоколада и кондитерских изделий с начинкой — его мировая популярность продолжает расти наряду с растущими ожиданиями потребителей относительно качества, безопасности продукции и соответствия нормативным требованиям.
Определение конкретного состава ингредиентов в шоколаде имеет первостепенное значение из-за присущей ему сложности пищевой матрицы. Шоколад — это плотная многофазная система, состоящая из липидов, углеводов, полифенолов и белков, которые сильно мешают прямым аналитическим измерениям.
В этой статье мы представляем метод ВЭЖХ для определения динатриевой соли ЭДТА (Na2EDTA) в шоколаде. Динатриевая соль ЭДТА является добавкой, используемой в качестве хелатирующего агента для связывания микроэлементов, тем самым предотвращая окисление липидов и продлевая срок годности. Поскольку чрезмерное потребление ЭДТА может нарушить усвоение необходимых минералов в организме человека, максимально допустимые пределы ее включения в пищевые продукты строго контролируются регулирующими органами.
Почему ВЭЖХ?
Количественное определение следовых количеств динатриевой соли ЭДТА в сильно интерферирующей, богатой жирами матрице шоколада представляет значительную сложность из-за интерференции компонентов шоколада с анализом. Для преодоления этой проблемы стандартные методы требовали бы твердофазной экстракции (ТФЭ) для удаления матричных интерференций и обогащения целевого аналита.
Однако на практике после прохождения образцов через картридж Welchrom P-SAX SPE целевой аналит не адсорбировался, что ограничивало степень извлечения. Поэтому вместо этого мы использовали трихлорметан (CHCl3) для экстракции, а затем ВЭЖХ для прямого анализа экстрагированного образца.
Метод
Предварительная обработка
Взвесьте 5 ± 0,01 г образца шоколада, поместите его в центрифужную пробирку объемом 50 мл, добавьте 25 мл воды, перемешайте на вортексе, обработайте ультразвуком в течение 20 минут и центрифугируйте при 7500 об/мин в течение 5 минут. Перенесите супернатант в другую центрифужную пробирку объемом 50 мл и повторите экстракцию оставшегося осадка. Объедините оба супернатанта и разбавьте водой до 50 мл. Отберите 10 мл пипеткой, добавьте 5 мл CHCl3, хорошо перемешайте, обработайте ультразвуком в течение 20 минут и центрифугируйте при 7500 об/мин в течение 5 минут. Перенесите 5 мл супернатанта, добавьте 0,5 мл треххлористого железа (FeCl3), обработайте ультразвуком в течение 20 минут и профильтруйте через мембрану.
Хроматографические условия
- Колонка: Ultisil Plus C18 (4,6×250 мм, 5 мкм)
- Подвижная фаза: метанол / ТБАБ-CH3COONa = 15 / 85
- Температура колонки: 35 °C
- Скорость потока: 0,8 мл/мин
- Объем введения: 10 мкл
- Приготовление подвижной фазы:
- ТБАБ-CH3COONa: Взвесить 6,45 г тетрабутиламмония бромида (ТБАБ) и 2,46 г ацетата натрия, добавить 1000 мл воды и обработать ультразвуком до растворения. Затем довести рН до 4,0 фосфорной кислотой.
- Метанол: ВЭЖХ-чистота.
Хроматограмма и данные
Результат: После экстракции трихлорметаном и разделения на колонке Ultisil Plus C18 степень извлечения целевого образца шоколада достигает 88,2%.