Посвятить или поделиться? Как максимально эффективно использовать колонку ВЭЖХ
Введение
В рутинном лабораторном анализе аналитики часто сталкиваются со сценариями, препятствующими производительности. Рассмотрим следующие сценарии:
"Что это за неизвестный пик? Он мешает аналиту-мишени весь день! Это продукт деградации или перекрестное загрязнение из другого проекта? Как мне промыть колонку, не зная, что ее загрязнило?!"
"Я давно использую эту колонку для Проекта А с хорошей эффективностью и результатами по форме пиков, и что с ней случилось сегодня? Почему она продолжает давать ненадежное удерживание и уродливые формы пиков? Подождите, может быть, это от коллеги, который вчера использовал колонку для другого проекта по разработке метода?"
"У нас гора срочных проектов! Закупка новых колонок занимает слишком много времени, чтобы уложиться в срок. Как мне справиться с существующими колонками?"
В идеальном мире решение вышеуказанных сценариев — это "выделенное использование": всегда назначать одну колонку одному конкретному методу. Но в реальности экономика малых и средних лабораторий часто делает это непрактичным.
В этой статье мы исследуем баланс между выделенным и совместным использованием ВЭЖХ-колонок, обеспечивая надежные аналитические результаты при максимальном использовании доступных ресурсов.
Влияние использования многофункциональных колонок
Использование одной колонки ВЭЖХ для нескольких методов создает несколько рисков, которые могут поставить под угрозу качество данных.
Основная проблема — необратимая модификация стационарной фазы. Различные образцы содержат различные компоненты; некоторые "сильно удерживаемые" вещества могут так крепко связываться с упаковочным материалом, что стандартные циклы промывки не могут их удалить.
Кроме того, переключение между различными системами подвижной фазы может вызвать элюирование ранее адсорбированных загрязнителей, что приведет к нестабильности базовой линии или появлению "фантомных пиков" во время последующих анализов.
Если колонка не тщательно очищается при переходе между методами, перекрестное загрязнение практически неизбежно, что приводит к ненадежным результатам и значительным простоям для устранения неполадок.
Преимущества использования выделенной колонки
В отличие от использования многофункциональных колонок, выделение каждой колонки для одного проекта обеспечивает значительные аналитические и эксплуатационные преимущества.
- Стабильная производительность: Выделенные колонки демонстрируют более стабильное время удерживания и формы пиков на протяжении всего срока службы.
- Упрощенное устранение неполадок: Когда матрица образца известна и постоянна, любое отклонение в производительности легче отследить. Если возникает аномалия, источником, вероятно, является текущий образец или подвижная фаза, а не "скрытый" загрязнитель из предыдущего проекта. Это значительно сокращает затраты на диагностику.
- Увеличенный срок службы колонки: Частое переключение между различными методами — особенно теми, которые имеют совершенно разные химические среды — ускоряет деградацию стационарной фазы. Выделенное использование предотвращает преждевременную "гибель" колонки, вызванную неправильной промывкой или химической несовместимостью во время переходов между методами.
Когда выделенное использование является обязательным?
В аналитической практике существуют условия, когда "совместное" использование колонки не просто рискованно, но и технически неприемлемо. Выделенное использование необходимо в таких случаях, как:
- Ион-парная хроматография: Ион-парные реагенты, как известно, трудно полностью смыть. После использования колонки с ион-парными реагентами ее никогда не следует использовать для разработки общих методов или несвязанных проектов.
- Матрицы с высоким уровнем загрязнения: Известно, что некоторые образцы содержат сложные, сильно удерживаемые компоненты, которые "загрязняют" колонку. Примеры включают анализ консервантов или сложных растительных экстрактов, таких как женьшень. Для этих применений используйте колонки, специально изготовленные для целевых аналитов.
В таких случаях колонки должны оставаться выделенными для этого конкретного применения и никогда не использоваться для разработки общих методов или несвязанных проектов.
Что делать, если выделенное использование невозможно?
Если бюджетные ограничения делают выделенное использование каждой колонки невозможным, как мы должны управлять ресурсами колонок и внедрять протоколы для максимальной производительности колонки?
Во-первых, совместно используйте обычные колонки (например, C18) и оставляйте редкие (например, для сахаров, аминокислот) выделенными.
Далее, ведите подробный "паспорт колонки" или журнал. Записывайте название каждого образца, состав подвижной фазы, pH и имя аналитика для каждой инъекции, чтобы можно было легко определить первопричину снижения производительности.
Наконец, никогда не переключайте колонку между проектами без тщательной процедуры промывки. Используйте обратную промывку (которая поддерживается большинством колонок Welch Materials), если это возможно, так как она очень эффективна для удаления твердых частиц и сильно адсорбированных загрязнителей, которые обычно накапливаются в головной части колонки.
