Замена колонок в ВЭЖХ: больше, чем просто соответствие спецификациям
Предыдущая статья:
Колонки Уэлча успешно заменили известные аналоги после повышения тарифов
Введение
При выборе замены колонки для ВЭЖХ большинство пользователей в первую очередь обращают внимание на тип субстрата (силикагель или полимер), структуру частиц (полностью пористая или поверхностно-пористая), привитую фазу (C18, фенил и т. д.) и размеры колонки (длину и внутренний диаметр). Затем внимание уделяется технологическим особенностям, таким как блокирование энд-групп или специальные функциональные модификации. Естественно, следует также учитывать такие параметры, как стабильность pH и максимальная рабочая температура.
Учитывая все эти факторы, можно определить подходящую заменяющую колонку — и это именно та основа, на которой базируются таблицы перекрестных ссылок производителей.
| Аджилент | Воды | Феноменекс | Уэлч |
|---|---|---|---|
| Серия ZORBAX RRHT | Серия Xbridge BEH | Серия Gemini-NX | Серия Xtimate |
| Порошелл 120 серии | Серия КОРТЕКС | Серия Кинетекс | Серия Boltimate |
| Серия ZORBAX RRHD | Серия КОРТЕКС | Серия Луна Омега | Серия УВЭЖХ |
| XDB-C18 | Санфайр С18 | Колумбус C18 | Ультисил XB-C18 |
| TC-C18 (2) | Атлантида Т3 | Аква С18 | Ультисил AQ-C18 |
| ЗОРБАКС SB-C18 | HSS C18 SB | Н/Д | Ультисил ЛП-С18 |
| Преследование PFP | HSS PFP | Луна ПФП (2) | Ультисил ПФП |
| ZORBAX Eclipse PAH | ПАУ C18 | Венусил ЛАГ | Ультисил ПАУ |
| Био SEC | Белок BEH SEC | BioSep-SEC-S2000 | Xtimate Bio SEC-120 |
| BioSep-SEC-S3000 | Xtimate Bio SEC-300 | ||
| AdvanceBio HIC | Protein-Pak Hi Res HIC | Н/Д | Advanchrom HIC-Butyl |
Пример таблицы перекрестных ссылок Уэлча
Однако на практике только пробные запуски могут по-настоящему подтвердить, соответствует ли замененная колонка требованиям проекта: сохранение целевых пиков, форма пика и разрешение примесей.
Только за последние три месяца колонки Welch успешно заменили импортные бренды более чем в 100 случаях . Мы обнаружили, что следование описанному выше подходу даёт высокую вероятность успеха. Но вот интересное наблюдение: иногда неэквивалентная колонка на самом деле работает лучше. Как это происходит? Давайте рассмотрим несколько случаев.
Случай 1
Клиент:
«Мы использовали колонку SB-C18 для анализа родственных веществ. В вашей перекрёстной ссылке указано, что Ultisil LP-C18 — её аналог, верно?»
Уэлч:
«В плане соответствия всё верно. Но не могли бы вы подробнее рассказать о свойствах вашего образца, условиях хроматографирования и текущих результатах? Возможно, у нас есть ещё лучший вариант».
Клиент:
«Основное соединение — щелочное, pH подвижной фазы — 8,0, температура колонки — 40 °C. Вот хроматограмма:»
Уэлч:
«На хроматограмме я вижу, что форма основного пика не очень хорошая (коэффициент асимметрии пика 1,63), а разрешение между двумя пиками примесей после него плохое (Rs = 1,03). В SB-C18 используется силикагель без эндкеппирования, что оставляет много свободных силанолов (отрицательно заряженных), которые взаимодействуют с вашим основным аналитом (положительно заряженным при ионизации). Вероятно, именно поэтому пик имеет асимметрию пика. Я бы рекомендовал колонку с двойным эндкеппированием. Кроме того, поскольку ваши условия довольно требовательны, гибридная силикагельная колонка может быть ещё лучше. Исходя из этого, я рекомендую наш Xtimate C18 ».
Заказчик (после тестирования):
«Форма пика стала гораздо лучше (коэффициент асимметрии 1,07), а разрешение этих двух пиков примесей значительно улучшилось (Rs = 2,04). Это неожиданно идеальная замена!»
Случай 2
Клиент:
«Мы используем гидрохлорид лидокаина на колонке Symm C18, но её эффективность падает слишком быстро. У вас есть замена?»
Уэлч:
«Давайте посмотрим на ваши хроматографические условия».
Система подвижной фазы:
Фосфатный буфер (1,3 мл 1 моль/л NaH₂PO₄ + 32,5 мл 0,5 моль/л Na₂HPO₄, разбавленный водой до 1000 мл) – ацетонитрил (50:50), доведенный до pH 8,0 фосфорной кислотой.
Уэлч:
«Поскольку ваша подвижная фаза сильнощелочная (pH 8,0), это уже верхний предел для обычных силикагелевых колонок. Я бы рекомендовал гибридную силикагелевую колонку — нашу Xtimate C18 (pH 1,0–12,5)».
Заказчик (после тестирования):
«Разделение с колонкой Уэлча эквивалентно, но количество инжекций до потери эффективности в три раза больше, чем раньше!»
Случай 3
Клиент:
«Для нашего проекта по летрозолу мы сейчас используем колонку Tri C18 (гибридный силикагель, размер пор 120 Å, содержание углерода 20%). Нам нужна более дешёвая альтернатива отечественного производства. Главное, чтобы разрешение было приемлемым, и чем быстрее элюируются пики, тем лучше».
Уэлч:
«Понял. Не могли бы вы поделиться условиями хроматографирования?»
Система подвижной фазы:
А: Вода
Б: Ацетонитрил
Уэлч:
Ваша система довольно проста, поэтому обычной силикагелевой колонки должно быть достаточно. Учитывая вашу потребность в более быстром элюировании, я бы рекомендовал колонку с немного большим размером пор и меньшим содержанием углерода — нашу Ultisil Plus C18 (размер пор 130 Å, содержание углерода 10%). Это уменьшает взаимодействие с аналитом, ускоряя разделение.
Заказчик (после тестирования):
«Это именно то, что нам было нужно!»
Заключение
Приведённые выше примеры говорят сами за себя: замена колонки — это не просто подбор параметров насадки или соблюдение принципа «один к одному». Даже в колонках C18 селективность может значительно различаться (см. «Четыре столпа колонок Welch ODS» ). В некоторых случаях то, что начинается как «замена», может фактически перерасти в «оптимизацию».
В компании Welch мы уделяем особое внимание комплексной, многомерной оценке, учитывая специфику применения, физико-химические свойства аналитов и весь набор хроматографических условий. Наша цель — не только обеспечить соответствие требованиям, но и повысить эффективность и точность анализа, предлагая индивидуальные решения, соответствующие потребностям каждого клиента.