Набор для аминокислотного метода Уэлча, используемый в исследовании семаглутида

В Welch Materials мы гордимся тем, что предоставляем хроматографические решения, способствующие инновациям в области медико-биологических наук. Мы рады сообщить, что наш набор для определения аминокислот успешно применялся в недавнем рецензируемом исследовании, опубликованном Precise Biopharma Private Limited в World Journal of Biology Pharmacy and Health Sciences.

Статья под названием «Разработка и валидация метода ВЭЖХ для определения молярного соотношения аминокислот в семаглутиде» демонстрирует надежные аналитические возможности решения Welch для анализа аминокислот в сложных рабочих процессах характеризации пептидов.

Это сотрудничество является важной вехой не только для Welch, но и для более широкой области пептидной терапии, где точное профилирование аминокислот остается критически важным для разработки лекарств, контроля качества и соответствия нормативным требованиям.

Исследование, проведенное Precise Biopharma, было сосредоточено на разработке точного, достоверного и надежного метода ВЭЖХ для количественного определения молярного соотношения аминокислот в семаглутиде, агонисте рецепторов ГПП-1, используемом для лечения диабета 2 типа и ожирения. Как долгодействующий пептид, содержащий 34 аминокислотных остатка, семаглутид представляет аналитические трудности из-за своей структурной сложности, химических модификаций и высокой молекулярной массы.

Целью исследования было разработать и валидировать аналитический метод, способный определять содержание аминокислот в семаглутиде. Цель заключалась в том, чтобы молярные соотношения аминокислот соответствовали требованиям для его предполагаемого аналитического применения.

Для этого исследователи выбрали набор для определения аминокислот Welch, который объединяет высокоэффективную колоночную технологию с оптимизированными протоколами преколоночной дериватизации и системами подвижных фаз, обеспечивая высокоразрешающее разделение и количественное определение аминокислот.

Набор для определения аминокислот Welch предназначен для упрощения и стандартизации анализа аминокислот с использованием преколоночной дериватизации с помощью реагентов PITC. В набор входят:

• Высокоэффективная колонка для анализа аминокислот.
• Набор дериватизирующих реагентов (A и B, по 10 мл/флакон каждый), а также разбавитель (20 мл/флакон).
• Стандарт аминокислот (1 мл).

Основные преимущества:

• Быстрая реакция дериватизации – завершается всего за 30 минут при комнатной температуре.
• Высокая стабильность производных, обеспечивающая постоянное и надежное детектирование.
• Единственный, четко определенный продукт реакции для каждой аминокислоты.
• Короткое общее время анализа, повышающее эффективность и пропускную способность лаборатории.

В опубликованной статье семаглутид подвергали гидролизу соляной кислотой при 110°C в течение 16 часов, затем (после охлаждения до комнатной температуры) выпаривали на водяной бане при 75°C, и в пробирку с гидролизатом подавали вакуум. Затем гидролизованный образец смешивали с разбавленными дериватизирующими реагентами A и B из набора.

Разделение проводили на колонке Welch Ultisil Amino Acid (4,6 × 250 мм, 5 мкм) по градиентной программе с использованием раствора тригидрата ацетата натрия: ацетонитрила (93:7) в качестве подвижной фазы А и ацетонитрила: воды (80:20) в качестве подвижной фазы В. Детектирование проводили с использованием ПДА/УФ-детектора.

Метод успешно разделял и количественно определял 14 аминокислот в семаглутиде с высокой линейностью (коэффициент корреляции не менее 0,99 для всех аминокислот) и низким относительным стандартным отклонением (%RSD каждого пика аминокислоты менее 5,0%).

Метод ВЭЖХ, разработанный с использованием набора для анализа аминокислот Welch, был тщательно валидирован для определения молярных соотношений аминокислот в семаглутиде. Параметры валидации включали пригодность системы, специфичность, линейность и диапазон, точность, прецизионность и промежуточную прецизионность (надежность).

• Пригодность системы была установлена путем оценки повторяемости площадей пиков аминокислот по трем инжекциям стандартного раствора с %RSD < 5,0%.
• Специфичность была определена путем наблюдения за всеми пиками аминокислот, полученными из стандартного раствора, которые были хорошо разрешены друг от друга и прошли тест на чистоту пиков.
• Линейность оценивалась в диапазоне концентраций от 12,5% до 200% от уровня спецификации, используя пять уровней концентрации для каждой аминокислоты. Каждый уровень был введен в трех повторностях. Регрессионный анализ показал, что коэффициенты корреляции (R²) были не менее 0,99 для всех аминокислот, а наклон, пересечение и % Y-пересечение находились в пределах допустимых значений.
• Точность была подтверждена исследованиями восстановления, проведенными при 80%, 100% и 120% от стандартной концентрации. Каждый уровень был введен в трех повторностях.
• Прецизионность метода оценивалась с помощью шести независимых приготовлений тестовых образцов семаглутида, при этом %RSD по шести приготовлениям был ниже 5,0%.
• Промежуточная прецизионность (надежность) была достигнута путем повторения того же теста вторым аналитиком с использованием разных колонок, приборов и в разные дни. Все двенадцать определений (из совокупной прецизионности метода и промежуточной прецизионности) показали кумулятивный %RSD в пределах 5,0%.

Welch Materials стремится развивать хроматографическую науку посредством тесного сотрудничества с отраслевыми партнерами и научно-исследовательскими учреждениями. Успешное использование нашего набора для определения аминокислот компанией Precise Biopharma подчеркивает важность высококачественных расходных материалов и технической поддержки для достижения аналитического совершенства.

В условиях быстрого расширения биофармацевтических инноваций, особенно в области пептидной и белковой терапии, способность разрабатывать надежные аналитические методы остается крайне важной. От разработки формулы до конечного выпуска, анализ аминокислот играет ключевую роль в обеспечении безопасности, эффективности и соответствия нормативным требованиям продукта.