Открываем ключ к контролю качества лекарств ADC с помощью новых колонок HIC от Welch!
Введение
Антитело-лекарственные конъюгаты (АЛК) играют важную роль в онкологическом лечении. АЛК — это молекулы лекарственных препаратов, образованные путем конъюгации антител с цитотоксическими грузами через линкеры. Их остроумный дизайн объединяет точную способность таргетного действия антител с мощным цитотоксическим эффектом низкомолекулярных соединений, что делает АЛК «биологической ракетой» для целенаправленной терапии рака.
На сегодняшний день в мире одобрено 17 АЛК-препаратов, причем только в 2024 году 83 новых АЛК вступили в клинические испытания. Объем мирового рынка АЛК оценивается более чем в 13 миллиардов долларов.
Однако структурная сложность и присущая АЛК гетерогенность создают значительные проблемы в контроле качества, требуя строгих аналитических методологий. Среди них соотношение лекарственного препарата к антителу (DAR) является критическим атрибутом качества, поскольку оно напрямую отражает количество полезной нагрузки на каждое антитело, влияя как на терапевтическую эффективность, так и на безопасность.
Следовательно, точное определение и мониторинг DAR имеют важное значение на протяжении всего процесса разработки и коммерческого производства АЛК.
Представляем Welch Advanchrom HIC-Butyl
Хроматография гидрофобного взаимодействия (HIC) — широко используемый хроматографический метод, который разделяет молекулы на основе различий в гидрофобности поверхности. Это важный метод для определения и характеризации DAR в АЛК.
Для удовлетворения растущего спроса на высокоэффективное разделение белков Welch Materials представляет колонку Advanchrom HIC-Butyl. Эта высокоэффективная колонка HIC разработана с использованием передовых крупнопористых кремнеземных микросфер в сочетании с запатентованной технологией поверхностной связи, что делает ее идеальной для характеризации антител и АЛК.
Особенности продукта
- Уникальная химическая структура, обеспечивающая превосходную селективность для молекул АЛК
- Матрица из сверхчистых крупнопористых кремнеземных микросфер для превосходной эффективности колонки
- Низкая неспецифическая адсорбция, обеспечивающая высокую степень извлечения
- Отличная устойчивость к давлению и долговечность
- Выдающаяся воспроизводимость от партии к партии
- Эффективное удерживание и разделение с использованием более низких концентраций солей
Информация о продукте
| Наименование продукта | Колонка Advanchrom HIC-Butyl | Материал колонки | Нержавеющая сталь |
| Привитая фаза | Бутил | Размеры | 4.6×50 мм; 4.6×35 мм |
| Матрица | Сверхчистый крупнопористый кремнезем | Макс. давление | 6000 psi |
| Размер частиц | 3 мкм | Макс. температура | 60°C |
| Размер пор | 1000 Å | Диапазон pH | 2 – 8 |
| Наименование продукта | Колонка Advanchrom HIC-Butyl |
| Привитая фаза | Бутил |
| Матрица | Сверхчистый крупнопористый кремнезем |
| Размер частиц | 3 мкм |
| Размер пор | 1000 Å |
| Материал колонки | Нержавеющая сталь |
| Размеры | 4.6×50 мм; 4.6×35 мм |
| Макс. давление | 6000 psi |
| Макс. температура | 60°C |
| Диапазон pH | 2 – 8 |
Примеры применения Advanchrom HIC-Butyl
Применение HIC-UV: анализ DAR биспецифического АЛК
| Образец | АЛК | ||
| Колонка | Advanchrom HIC-Butyl | ||
| Спецификация | 3 мкм, 4.6×50 мм | ||
| Подвижные фазы | A: 100 мМ раствор PB + 1.0 M (NH4)2SO4 , pH 7.0 B: 100 мМ раствор PB, pH 7.0 / IPA = 80/20 |
||
| Скорость потока | 0.5 мл/мин | ||
| Длина волны | 280 нм | ||
| Температура колонки | 25°C | ||
| Объем инъекции | 10 мкл | ||
| Программа элюции | Время (мин) | Фаза A (%) | Фаза B (%) |
| 0 | 90 | 10 | |
| 3 | 90 | 10 | |
| 35 | 0 | 100 | |
| 38 | 0 | 100 | |
| 39 | 90 | 10 | |
| 45 | 90 | 10 | |
Вывод: В условиях сульфата аммония молекулы АЛК с различными значениями DAR показывают эффективное удерживание и разделение на колонках HIC. Неконъюгированное антитело, обладающее наименьшей гидрофобностью, элюируется первым, в то время как молекулы АЛК с более высокой загрузкой препарата проявляют более сильную гидрофобность и элюируются позже.
Применение HIC-MS: анализ моноклонального АЛК с DAR2 и интактного антитела
Хотя сульфат аммония широко используется для определения DAR, он является нелетучим и несовместимым с масс-спектрометрией (МС). Для решения этой проблемы мы также протестировали систему подвижной фазы с летучим ацетатом аммония.
Условия:
| Образец | АЛК / Интактное антитело | ||
| Колонка | Advanchrom HIC-Butyl | ||
| Спецификация | 3 мкм, 4.6×50 мм | ||
| Подвижные фазы | A: 1.0 M CH3COONH4 B: 25 мМ CH3COONH4 / ACN = 70/30 |
||
| Скорость потока | 0.5 мл/мин | ||
| Длина волны | 280 нм | ||
| Температура колонки | 30°C | ||
| Объем инъекции | 10 мкл | ||
| Программа элюции | Время (мин) | Фаза A (%) | Фаза B (%) |
| 0 | 100 | 0 | |
| 2 | 100 | 0 | |
| 15 | 0 | 100 | |
| 20 | 0 | 100 | |
| 22 | 100 | 0 | |
| 30 | 100 | 0 | |
Заключение: В условиях ацетата аммония достигаются отличные удержание и форма пика как для DAR2 ADC, так и для интактного антитела, что обеспечивает МС-совместимое решение для будущей характеризации DAR.
Сравнение с колонками конкурентов: Разделение стандартных белков
| Образец | (~1 мг/мл растворено в подвижной фазе А) 1. РНКаза А; 2. Лизоцим; 3. α-Химотрипсиноген |
||
| Колонка | Advanchrom HIC-Butyl | ||
| Спецификация | 3 мкм, 4.6×50 мм; 3 мкм, 4.6×35 мм | ||
| Подвижные фазы | A: 100 мМ раствор PB + 2.0 М (NH4)2SO4 , pH 7.0 B: 100 мМ раствор PB, pH 7.0 / ACN = 90/10 |
||
| Скорость потока | 1.0 мл/мин | ||
| Длина волны | 280 нм | ||
| Температура колонки | 30°C | ||
| Объем инъекции | 10 мкл | ||
| Программа элюирования | Время (мин) | Фаза A (%) | Фаза B (%) |
| 0 | 100 | 0 | |
| 1 | 100 | 0 | |
| 15 | 0 | 100 | |
| 20 | 0 | 100 | |
| 22 | 100 | 0 | |
| 30 | 100 | 0 | |
Заключение: Обе колонки Welch HIC обеспечили отличное удержание и разделение трех стандартных белков, демонстрируя превосходную форму пика и теоретические тарелки по сравнению с колонками конкурентов.
Рекомендации по подвижной фазе
Из-за нелетучей природы обычной подвижной фазы сульфата аммония она несовместима с масс-спектрометрией и, следовательно, может использоваться только в системах HIC-UV. Для применений HIC-MS вместо нее следует использовать летучий ацетат аммония.
Обеспечение качества
Каждая колонка Advanchrom HIC-Butyl производится с использованием отработанного процесса упаковки и строгого контроля качества для обеспечения превосходных характеристик разделения.
Информация для заказа
| Номер детали | Продукт | Спецификация |
| 0001-01037 | Advanchrom HIC-Butyl | 3 мкм, 4.6×50 мм |
| 0001-01036 | 3 мкм, 4.6×35 мм |
Для получения дополнительной информации и запросов, пожалуйста, свяжитесь с нашим отделом продаж по адресу info@welchmat.com, и мы с удовольствием вам поможем.