Открываем ключ к контролю качества лекарств ADC с помощью новых колонок HIC от Welch!
Введение
Конъюгаты антител с лекарственными препаратами (ADC) играют важную роль в лечении онкологии . ADC — это молекулы лекарственных препаратов, образующиеся путём конъюгации антител с цитотоксическими молекулами через линкеры. Их гениальная конструкция сочетает в себе точную таргетную способность антител с мощным цитотоксическим действием малых молекул, что делает ADC «биологической ракетой» для таргетной терапии рака.
На сегодняшний день во всем мире одобрено 17 препаратов ADC, и только в 2024 году 83 новых ADC начнут клинические испытания. Мировой рынок ADC оценивается более чем в 13 миллиардов долларов.
Однако структурная сложность и присущая им гетерогенность ADC создают значительные трудности при контроле качества, требуя применения строгих аналитических методик. Соотношение лекарственного препарата к антителу (DAR) является критически важным показателем качества, поскольку оно напрямую отражает количество полезной нагрузки на антитело, влияя как на терапевтическую эффективность, так и на безопасность.
Поэтому точное определение и мониторинг DAR имеют важное значение на всех этапах разработки и коммерческого производства АЦП.
Представляем Welch Advanchrom HIC-Butyl
Гидрофобная хроматография (HIC) — широко используемый хроматографический метод, позволяющий разделять молекулы на основе различий в гидрофобности поверхности. Это важный метод определения и характеристики DAR в ADC.
Чтобы удовлетворить растущий спрос на высокопроизводительное разделение белков, компания Welch Materials представляет колонку Advanchrom HIC-Butyl . Эта высокопроизводительная колонка для HIC разработана с использованием современных крупнопористых кремниевых микросфер в сочетании с запатентованной технологией поверхностной адгезии, что делает её идеальной для характеристики антител и конъюгатов антител (АЦП).
Особенности продукта
- Уникальная химическая конструкция, обеспечивающая превосходную селективность к молекулам ADC
- Матрица микросфер из кремнезема сверхвысокой чистоты с крупными порами для превосходной эффективности колонки
- Низкая неспецифическая адсорбция обеспечивает высокую скорость извлечения
- Отличная устойчивость к давлению и долговечность
- Исключительная воспроизводимость от партии к партии
- Эффективное удержание и разделение при использовании более низких концентраций соли
Информация о продукте
| Название продукта | Колонка Advanchrom HIC-Butyl | Материал колонны | Нержавеющая сталь |
| Связанная фаза | Бутил | Размеры | 4,6×50 мм; 4,6×35 мм |
| Матрица | Крупнопористый диоксид кремния сверхвысокой чистоты | Максимальное давление | 6000 фунтов на квадратный дюйм |
| Размер частиц | 3 мкм | Максимальная температура | 60°С |
| Размер пор | 1000 Å | Диапазон pH | 2 – 8 |
| Название продукта | Колонка Advanchrom HIC-Butyl |
| Связанная фаза | Бутил |
| Матрица | Крупнопористый диоксид кремния сверхвысокой чистоты |
| Размер частиц | 3 мкм |
| Размер пор | 1000 Å |
| Материал колонны | Нержавеющая сталь |
| Размеры | 4,6×50 мм; 4,6×35 мм |
| Максимальное давление | 6000 фунтов на квадратный дюйм |
| Максимальная температура | 60°С |
| Диапазон pH | 2 – 8 |
Примеры применения Advanchrom HIC-Butyl
Применение HIC-UV: DAR-анализ биспецифического ADC
| Образец | АЦП | ||
| Столбец | Advanchrom HIC-Butyl | ||
| Спецификация | 3 мкм, 4,6×50 мм | ||
| Подвижные фазы | A: 100 мМ раствор PB + 1,0 М (NH 4 ) 2 SO 4 , pH 7,0 B: 100 мМ раствор PB, pH 7,0 / IPA = 80/20 |
||
| Скорость потока | 0,5 мл/мин | ||
| Длина волны | 280 нм | ||
| Температура колонки | 25°С | ||
| Объем впрыска | 10 мкл | ||
| Программа элюирования | Время (мин) | Фаза А (%) | Фаза B (%) |
| 0 | 90 | 10 | |
| 3 | 90 | 10 | |
| 35 | 0 | 100 | |
| 38 | 0 | 100 | |
| 39 | 90 | 10 | |
| 45 | 90 | 10 | |
Заключение: В условиях сульфата аммония молекулы ADC с различными значениями DAR демонстрируют эффективное удерживание и разделение на колонках HIC. Неконъюгированное антитело, обладающее наименьшей гидрофобностью, элюируется первым, в то время как молекулы ADC с более высокой концентрацией лекарственного средства проявляют более сильную гидрофобность и элюируются позже.
Применение HIC-MS: анализ моноклонального ADC DAR2 и интактных антител
Хотя сульфат аммония широко используется для определения DAR, он нелетуч и несовместим с масс-спектрометрией (МС). Для решения этой проблемы мы также протестировали систему подвижной фазы на основе летучего ацетата аммония .
Условия:
| Образец | ADC / Интактное антитело | ||
| Столбец | Advanchrom HIC-Butyl | ||
| Спецификация | 3 мкм, 4,6×50 мм | ||
| Подвижные фазы | А: 1,0 М CH 3 COONH 4 B: 25 мМ CH 3 COONH 4 / ACN = 70/30 |
||
| Скорость потока | 0,5 мл/мин | ||
| Длина волны | 280 нм | ||
| Температура колонки | 30°С | ||
| Объем впрыска | 10 мкл | ||
| Программа элюирования | Время (мин) | Фаза А (%) | Фаза B (%) |
| 0 | 100 | 0 | |
| 2 | 100 | 0 | |
| 15 | 0 | 100 | |
| 20 | 0 | 100 | |
| 22 | 100 | 0 | |
| 30 | 100 | 0 | |
Заключение: В условиях ацетата аммония достигаются превосходное удерживание и форма пика как для DAR2 ADC, так и для интактного антитела, что обеспечивает совместимое с МС решение для будущей характеристики DAR.
Сравнение с колонками конкурентов: разделение стандартных белков
| Образец | (~1 мг/мл, растворенный в подвижной фазе А) 1. РНКаза А; 2. Лизоцим; 3. α-Химотрипсиноген |
||
| Столбец | Advanchrom HIC-Butyl | ||
| Спецификация | 3 мкм, 4,6×50 мм; 3 мкм, 4,6×35 мм | ||
| Подвижные фазы | A: 100 мМ раствор PB + 2,0 М (NH 4 ) 2 SO 4 , pH 7,0 B: 100 мМ раствор PB, pH 7,0 / ACN = 90/10 |
||
| Скорость потока | 1,0 мл/мин | ||
| Длина волны | 280 нм | ||
| Температура колонки | 30°С | ||
| Объем впрыска | 10 мкл | ||
| Программа элюирования | Время (мин) | Фаза А (%) | Фаза B (%) |
| 0 | 100 | 0 | |
| 1 | 100 | 0 | |
| 15 | 0 | 100 | |
| 20 | 0 | 100 | |
| 22 | 100 | 0 | |
| 30 | 100 | 0 | |
Заключение: Обе колонки Welch HIC обеспечили превосходное удерживание и разделение трех стандартных белков, обеспечив превосходную форму пика и теоретические тарелки по сравнению с колонками конкурентов.
Рекомендация по подвижной фазе
Из-за нелетучести обычной подвижной фазы на основе сульфата аммония она несовместима с масс-спектрометрией и может использоваться только в системах HIC-UV. Для систем HIC-MS следует использовать летучий ацетат аммония.
Гарантия качества
Каждая колонка Advanchrom HIC-Butyl изготавливается с использованием отработанного процесса набивки и строгого контроля качества для обеспечения превосходной эффективности разделения.
Информация о заказе
| Номер детали | Продукт | Спецификация |
| 0001-01037 | Advanchrom HIC-Butyl | 3 мкм, 4,6×50 мм |
| 0001-01036 | 3 мкм, 4,6×35 мм |
Для получения дополнительной информации и направления запросов обращайтесь в наш отдел продаж по адресу info@welchmat.com , и мы окажем вам всестороннюю поддержку.