[Readers Insight] Почему возникают "призрачные" пики?

Эта статья написана штатным автором Welch Chromatography Mound. Содержание статьи отражает исключительно точку зрения автора.

В ВЭЖХ-анализе фантомные пики — это досадная проблема, с которой мы периодически сталкиваемся. Фантомные пики могут появляться в различных местах хроматограммы, и их отклик иногда может быть значительным. Хотя они, как правило, не мешают качественному или количественному анализу целевых пиков, их присутствие все же вызывает беспокойство.

Существует множество возможных причин появления фантомных пиков, и даже опытные специалисты могут предлагать различные объяснения для одного и того же эксперимента и хроматограммы — отсюда и термин «фантомный пик».

Определение точной молекулярной идентичности фантомного пика часто затруднено, но загрязнение подвижной фазы является наиболее распространенным источником.

• Даже реагенты, помеченные как "Гарантированная чистота" (>99,8%) или "Хроматографическая чистота", могут содержать примеси, такие как пластификаторы или антиоксиданты. Чем больше добавок присутствует в подвижной фазе — кислот, оснований, буферных солей или реагентов для ион-парной хроматографии — тем выше вероятность внесения таких примесей.
• Буферные компоненты в подвижной фазе могут способствовать росту микроорганизмов во время хранения при комнатной температуре; микробные метаболиты могут создавать фантомные пики, которые мешают анализу.
• Поскольку подвижные фазы химически сложны, они могут содержать следовые ионы тяжелых металлов, которые при длительном отстаивании могут образовывать комплексы с растворителями (вода, метанол, ацетонитрил) и создавать координационные соединения с измеряемым УФ-поглощением.

• Распространенные источники загрязнения включают иглу автосэмплера и смеситель. Если ранее анализируемый образец имел высокую концентрацию, на игле могут оставаться чрезмерные остатки.
• При смене подвижных фаз остаточная жидкость в головке насоса от предыдущей подвижной фазы может загрязнить новую подвижную фазу.
• Сильно удерживаемые компоненты из предыдущего ввода могут не полностью элюироваться из колонки и вымываться при последующих вводах.
• Низкополярные соединения могут выпадать в осадок в начале колонки, когда подвижная фаза содержит относительно высокую долю водной фазы; эти осадки могут предпочтительно вводиться в колонку при следующем запуске.
• Большие, резкие изменения в составе градиента также могут вызывать выпадение осадка для некоторых соединений (например, 5-метилцитозина).
• Повторное использование виал автосэмплера может оставлять остатки, которые способствуют появлению фантомных пиков.