[Readers Insight] Сдвиги времени удерживания: почему они происходят?

В этой статье мы обсудим несколько возможных причин.

Изменения в составе подвижной фазы являются частой причиной дрейфа времени удерживания. Например, если флаконы с растворителем плохо запечатаны, органический компонент подвижной фазы (например, ацетонитрил, метанол) будет испаряться быстрее, чем водный компонент, со временем, уменьшая органическую долю и изменяя полярность подвижной фазы.

Аналогично, изменения pH подвижной фазы и концентрации буферной соли также влияют на время удерживания — например, потеря летучих компонентов, таких как муравьиная кислота или аммиак, или поглощение CO₂ из воздуха щелочными буферными системами, изменят pH. Выпадение буферных солей в осадок также может сильно влиять на аналиты, чувствительные к концентрации соли.

Распространенные причины изменения состава подвижной фазы в лабораториях включают:

• Когда несколько проектов или несколько пользователей используют один прибор, флаконы с подвижной фазой часто меняются местами, а иногда после замены забывают закрыть крышки.
• Подвижные фазы для нормально-фазовой хроматографии очень летучи и должны быть плотно запечатаны герметизирующей пленкой вокруг крышки во время использования.
• Видимые капли на внутренней стенке флакона с растворителем указывают на испарение внутри флакона — осторожно переверните или перемешайте флакон перед использованием.

Удерживание тесно связано с температурой. Если температура термостата колонки нестабильна или термостат колонки не используется, легко возникает дрейф времени удерживания. Кроме того, воздействие на колонку подвижных фаз с экстремальным pH может изменить химический состав стационарной фазы, что приведет к серьезной потере эффективности колонки.

При разработке метода неправильно разработанная программа градиента — в частности, отсутствие достаточного времени для повторной уравновешивания колонки до начальных градиентных условий — также приведет к дрейфу времени удерживания.

При смешивании подвижных фаз правильная работа смесительных клапанов является ключом к поддержанию стабильного времени удерживания. Неисправные или плохо откалиброванные смесительные клапаны будут производить фактические соотношения смешивания, отличающиеся от заданных значений.

Изношенные уплотнения насоса, пузырьки воздуха в обратных клапанах или небольшие утечки в системе могут уменьшить фактический объем подвижной фазы, подаваемой в колонку, или изменить ее состав, тем самым влияя на удерживание целевых пиков. Эти проблемы, связанные с прибором, следует проверить и устранить перед запуском образцов.

Хотя объем инжекции невелик (обычно ~10–20 мкл), изменение растворителя образца — даже просто переход от метанола к ацетонитрилу — все равно может вызвать изменения времени удерживания. Если полярность растворителя образца ниже, чем у начальной подвижной фазы, могут возникнуть эффекты растворителя, которые изменят форму и удерживание пика.

Рекомендуется растворять или готовить образцы в растворителе того же состава, что и начальная подвижная фаза, или в растворителе с равной или более высокой полярностью.