Ваш полный пакет знаний по иммуноферментному анализу (ИФА) уже здесь!

Иммуноферментный анализ (ИФА) — это иммуноферментный метод, появившийся после развития технологий иммунофлуоресценции и радиоиммуноанализа. С момента своего появления в начале 1970-х годов ИФА переживает бурный рост.

ИФА — это быстрый метод обнаружения, основанный на специфической реакции связывания антигенов с антителами. Он гениально сочетает высокую эффективность ферментативных реакций с исключительной специфичностью иммунного ответа. Этот метод позволяет точно определять следовые количества различных органических соединений.

Краткий обзор антигенов и антител

Антигены – это вещества, способные вызывать специфический иммунный ответ в организме. Попадая в организм, антигены могут запускать клеточный иммунитет и выработку антител. Реакционная способность антигенов зависит от антигенных детерминант или эпитопов. Одна молекула антигена может обладать различными кластерами детерминант, что способствует её разнообразным взаимодействиям с иммунной системой.

Принципиальная схема реакции связывания антиген-антитело

Антитела — это иммуноглобулины, способные специфически связываться с антигенами.

Связь между антигенами и антителами аналогична связи между ключом и замком: каждая пара соответствует уникальному ключу. Только при нахождении правильного ключа – антигена – он может открыть соответствующий замок – антитело.

02 Принцип иммуноферментного анализа

косвенный метод

1. Способствуют связыванию антигенов или антител с поверхностью твердофазного носителя с сохранением их активности.
2. Связать антитела или антигены с ферментом для образования антител или антигенов, меченых ферментом.
3. Во время анализа дайте возможность тестируемым антителам (или антигенам) и антигенам (или антителам), меченным ферментом, реагировать с антигеном (или антителом) на поверхности твердофазного носителя на разных этапах.
4. Используйте методы промывки для удаления несвязанных антигенов (или антител), меченых ферментом, при этом конечное количество фермента, связанного с твердофазным носителем, прямо пропорционально количеству тестируемого вещества в образце.
5. После добавления субстрата для ферментативной реакции субстрат катализируется ферментом с образованием окрашенного продукта.
6. Количество продукта напрямую зависит от количества исследуемого вещества в образце, и на основании интенсивности цветной реакции можно провести качественный или количественный анализ.

Классификация иммуноферментного анализа (ИФА)

Непрямой ИФА:
Нанесите известные антигены на твердофазный носитель и используйте вторичные антитела, меченные ферментом, для обнаружения неизвестных антител в тестовой жидкости.

Принципиальная схема иммуноферментного анализа (косвенный метод)

● Сэндвич-ИФА:

Нанесите известные антитела на твердофазный носитель, используйте первичные антитела, меченные ферментами, и обнаружьте растворимые антигены в тестовой жидкости.

Принципиальная схема процесса сэндвич-ИФА

Конкурентный ИФА：

Нанесите известные антитела или антигены на твердофазный носитель, используйте антигены или антитела, меченые ферментами, и обнаружьте растворимые антигены или антитела в тестовой жидкости.

Схема иммуноферментного анализа (метод определения ингибиторной активности)

1. Быстрое обнаружение:
   • Могут быть подготовлены в виде специализированных тестовых наборов, позволяющих одновременно тестировать несколько образцов и значительно сокращающих время обнаружения.
2. Сильная специфичность:
   • Основан на специфическом связывании антигенов и антител, демонстрируя высокий уровень селективности.
3. Высокая чувствительность:
   • Точность результатов и чувствительность соответствуют методам инструментального анализа.
4. Простая операция:
   • Нет необходимости в крупногабаритном оборудовании; тест-наборы можно обрабатывать напрямую, без вторичной обработки.
5. Простота продвижения:
   • Низкие технические требования к персоналу, что способствует легкому распространению технологий.

Благодаря своим характеристикам, таким как скорость, удобство и высокая чувствительность, ИФА подходит для проведения исследований на месте. Область его применения продолжает расширяться, и он широко используется в исследованиях пищевых продуктов и медицинских препаратов. В исследованиях пищевых продуктов он в основном используется для обнаружения остатков пестицидов в продуктах растительного происхождения, остатков ветеринарных препаратов в продуктах животного происхождения, микотоксинов, пищевых микроорганизмов, особых белков, тяжёлых металлов и т. д.