Новинка Blossmate AA-D｜Прямое разделение энантиомеров аминокислот методом ВЭЖХ
Трудности хирального анализа аминокислот
Основная сложность хирального анализа аминокислот заключается в разделении: L- и D-энантиомеры одной аминокислоты имеют одинаковый химический состав и очень близкие физико-химические свойства. Поэтому обычные методы обращённо-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), как правило, не обеспечивают достаточной селективности для их разделения.
Традиционные подходы нередко требуют дополнительных этапов: предколоночной дериватизации, специальных способов детектирования и длительной оптимизации методики.
Особенно трудоёмкой может быть дериватизация. Она усложняет пробоподготовку, увеличивает продолжительность анализа и вносит дополнительные источники вариабельности и погрешности. В результате подготовка к, казалось бы, простой аналитической задаче занимает значительно больше времени и усилий, чем само измерение.
Представляем Blossmate AA-D
Для упрощения хирального анализа аминокислот компания Welch Materials представляет Blossmate AA-D — хиральную колонку для ВЭЖХ. Неподвижная фаза Blossmate AA-D получена путем равномерного нанесения раствора производных D-пеницилламина на поверхность силикагеля с привитыми октадецильными группами (C18). Это покрытая (coated) хиральная колонка. Разделение основано на различиях в координационном взаимодействии L/D-энантиомеров с ионами меди, связанными в комплексы с хиральным покрытием.
Благодаря лигандообменному механизму Blossmate AA-D позволяет разделять хиральные соединения, способные образовывать хелатные комплексы с ионами меди, в том числе:
- аминокислоты и их производные;
- хиральные дикарбоновые и поликарбоновые кислоты;
- хиральные диамины и полиамины;
- пептиды;
- аминоспирты.
Колонка особенно подходит для рутинного анализа и контроля качества хиральных аминокислот.
Преимущества колонки
- Без дериватизации. Пробы можно непосредственно вводить в хроматограф и анализировать без предколоночной дериватизации. Это упрощает пробоподготовку, сокращает время анализа и снижает затраты на разработку методики.
- Совместимость с УФ-детектированием. После образования комплексов с ионами меди аминокислоты можно непосредственно детектировать при длине волны 254 нм. Колонки Blossmate AA-D совместимы со стандартными УФ-детекторами для ВЭЖХ и не требуют специального детектирующего оборудования.
- Высокая энантиоселективность. Хиральный лиганд на основе D-пеницилламина обеспечивает высокую энантиоселективность по отношению к аминокислотам. В приведённых испытаниях разрешение энантиомеров пролина достигает 10,55; для фенилаланина, тирозина и ряда других аминокислот значения разрешения также превышают 5.
Типоразмеры и рекомендации по эксплуатации
Blossmate AA-D выпускается в двух типоразмерах. Короткая колонка 4,6 × 50 мм, 3 мкм подходит для быстрого скрининга. Колонка 4,6 × 150 мм, 5 мкм обеспечивает более высокую эффективность и разрешение при рутинном анализе и контроле качества, позволяя сочетать скорость анализа с качеством разделения.
В качестве подвижной фазы используют раствор соли меди с добавлением органического модификатора при необходимости. Рекомендуется изопропанол; также допустимы метанол, этанол и ацетонитрил. Доля органического модификатора не должна превышать 15 %, за исключением метанола, для которого допустимо до 30 %.
Обычно используют сульфат меди(II) высокой чистоты (безводный CuSO₄). Концентрация ионов меди в растворе — от 0,5 до 4 ммоль/л; рекомендуемое значение — 2 ммоль/л.
Другие рабочие параметры колонки Blossmate AA-D:
- Диапазон pH: 4,0–7,0
- Температура колонки: 5–40 °C
- Объёмная скорость потока: 0,5–2,0 мл/мин
- Максимально допустимое давление: 30 МПа
Примеры применения
В типичных хроматографических условиях Blossmate AA-D обеспечивает разделение до базовой линии ряда DL-аминокислот и хиральных органических кислот. Примеры приведены в таблице и на хроматограммах ниже.
