Выбор оптимальной флэш-колонки: руководство по объему ввода при очистке
Флэш-хроматография — важный метод, широко используемый в органическом синтезе и фармацевтической химии для очистки ценных соединений, особенно на ранних стадиях скрининга. После идентификации перспективного активного соединения его выделение и очистка становятся критически важными, и использование флэш-колонок является одним из наиболее распространённых методов для этого процесса.
Флэш-колонки выпускаются разных размеров, с количеством наполнителя от 4 г до 330 г. Выбор правильного размера колонки в первую очередь зависит от объёма вводимой пробы, который является одним из важнейших параметров в процессе очистки.
Понимание объема инъекции при очистке
Объём ввода обычно представляет собой максимальное количество образца, которое можно ввести в колонку, сохраняя эффективность, чистоту и выход. Его можно разделить на две категории: теоретический максимальный объём ввода и эффективный максимальный объём ввода.
- Теоретический максимальный объём ввода : это максимальный объём, который может быть обработан колонкой без учёта таких факторов, как эффективность разделения. Он основан исключительно на ёмкости наполнителя. Различные типы хроматографических сред, такие как чистый силикагель и силикагель C18, имеют разные фазы связывания и механизмы разделения, что приводит к различиям в их способности работать с образцами. Например, теоретически максимальный объём ввода для чистого силикагеля составляет 1/10 массы геля, тогда как для силикагеля C18 он составляет 1/50 массы наполнителя.
- Эффективный максимальный объём ввода : На практике такие факторы разделения, как разрешение и растворимость, влияют на фактическое количество образца, которое можно использовать. Поэтому эффективный максимальный объём более актуален в реальных условиях и обычно используется при оптимизации процесса очистки.
Факторы, влияющие на объем инъекции
Двумя основными факторами, определяющими объем инъекции, являются разрешение и растворимость , которые напрямую влияют на возможность применения перегрузки, и если да, то как к ней следует подходить.
- Разрешение : Если целевое соединение и примеси хорошо разделены, можно увеличить объём инжекции. Однако с увеличением нагрузки разрешение может снизиться, что в конечном итоге скажется на выходе и чистоте. Таким образом, разрешение определяет возможность перегрузки.
- Растворимость : определяет метод перегрузки. Если образец обладает хорошей растворимостью, предпочтителен метод перегрузки по концентрации. В этом случае объём вводимой пробы остаётся постоянным, но концентрация пробы увеличивается, что приводит к более острым пикам и лучшему разделению. Если образец обладает плохой растворимостью, используется метод перегрузки по объёму, при котором объём вводимой пробы увеличивается. Однако этот метод несёт риск выпадения осадка пробы, поскольку пики имеют тенденцию к уширению и сглаживанию.
Выбор правильной флэш-колонки
Если вы не знаете, как выбрать подходящий размер флэш-колонки или определить объём ввода для вашей собственной флэш-колонки, рекомендации производителей, таких как Welch's WelFlash, могут оказаться полезными. В этих рекомендациях указаны размеры флэш-колонок и соответствующие им объёмы проб, что служит практической отправной точкой для эффективной очистки.
Флэш-хроматография продолжает оставаться надежным и универсальным инструментом в лабораториях, и, понимая такие ключевые факторы, как объем инъекции, разрешение и растворимость, исследователи могут оптимизировать процессы очистки для более высокой эффективности и лучших результатов.
Рекомендуемый объем инъекции в руководстве WelFlash
Спецификация |
4g |
2 г |
25 г |
40 г |
80 г |
120 г |
220 г |
330 г |
Объем инъекции 1 (г) |
0,01-0,02 |
0,03-0,06 |
0,05-0,1 |
0,1-0,2 |
0,2-0,4 |
0,3-0,6 |
0,5-1,0 |
0,75-1,5 |
Объем инъекции 2 (г) |
0,02-0,08 |
0,06-0,24 |
0,1-0,4 |
0,2-0,8 |
0,4-1,6 |
0,6-2,4 |
1.0-4.0 |
1,5-6,0 |
Объем инъекции 3 (г) |
0,08-0,4 |
0,24-1,2 |
0,4-2,0 |
0,8-4,0 |
1,6-8,0 |
2,4-12,0 |
4.0-22.0 |
6.0-33.0 |
Объем колонки |
8 мл |
24 мл |
40 мл |
80 мл |
160 мл |
240 мл |
400 мл |
600 мл |
Мин. расход |
5 мл/мин |
8 мл/мин |
10 мл/мин |
20 мл/мин |
25 мл/мин |
35 мл/мин |
45 мл/мин |
50 мл/мин |
Макс.расход |
18 мл/мин |
20 мл/мин |
25 мл/мин |
40 мл/мин |
50 мл/мин |
80 мл/мин |
90 мл/мин |
100 мл/мин |
Давление |
Макс. давление: 200 фунтов на кв. дюйм |
|||||||
Примечание:
Формула объема впрыска: ΔCV=l/Rf1-1/Rf2;
Матрица：силикагель 40-60мкм
Объем впрыска 1: объем впрыска ΔCV = 1
Объем впрыска 2: объем впрыска ΔCV = 2
Объем впрыска 3: объем впрыска ΔCV = 6
Приложение: Колонки WelFlash для препаративной жидкостной хроматографии низкого и среднего давления
Сферический силикагель 20-40 мкм
Номер детали |
Спецификация |
00001-03011 |
WelFlash® SiO 2 -1, 4 г, 20 шт./уп. |
00001-03021 |
WelFlash® SiO 2 -1, 12 г, 18 шт./уп. |
00001-03031 |
WelFlash® SiO 2 -1, 25 г, 12 шт./уп. |
00001-03042 |
WelFlash® SiO 2 -1, 40 г, 10 шт./уп. |
00001-03053 |
WelFlash® SiO 2 -1, 80 г, 10 шт./уп. |
00001-03063 |
WelFlash® SiO 2 -1, 120 г, 10 шт./уп. |
00001-03075 |
WelFlash® SiO 2 -1, 220 г, 6 шт./уп. |
00001-03084 |
WelFlash® SiO 2 -1, 330 г, 4 шт./уп. |
Сферический 20-40 мкм C18
Номер детали |
Спецификация |
00002-03011 |
WelFlash® C18-1, 4 г, 20 шт./уп. |
00002-03021 |
WelFlash® C18-1, 12 г, 18 шт./уп. |
00002-03031 |
WelFlash® C18-1, 25 г, 12 шт./уп. |
00002-03042 |
WelFlash® C18-1, 40 г, 10 шт./уп. |
00002-03053 |
WelFlash® C18-1, 80 г, 10 шт./уп. |
00002-03063 |
WelFlash® C18-1, 120 г, 10 шт./уп. |
00002-03075 |
WelFlash® C18-1, 220 г, 6 шт./уп. |
00002-03084 |
WelFlash® C18-1, 330 г, 4 шт./уп. |
Сферический фенил 20-40 мкм
Номер детали |
Спецификация |
00003-03011 |
WelFlash® Фенил, 4 г, 20 шт./уп. |
00003-03021 |
WelFlash® Фенил, 12 г, 18 шт./уп. |
00003-03031 |
WelFlash® Фенил, 25 г, 12 шт./уп. |
00003-03042 |
WelFlash® Фенил, 40 г, 10 шт./уп. |
00003-03053 |
WelFlash® Фенил, 80 г, 10 шт./уп. |
00003-03063 |
WelFlash® Фенил, 120 г, 10 шт./уп. |
00003-03075 |
WelFlash® Фенил, 220 г, 6 шт./уп. |
00003-03084 |
WelFlash® Фенил, 330 г, 4 шт./уп. |
Сферический 20-40 мкм NH2
Номер детали |
Спецификация |
00005-03011 |
WelFlash® NH 2 , 4 г, 20 шт./уп. |
00005-03021 |
WelFlash® NH 2 , 12 г, 18 шт./уп. |
00005-03031 |
WelFlash® NH 2 , 25 г, 12 шт./уп. |
00005-03042 |
WelFlash® NH 2 , 40 г, 10 шт./уп. |
00005-03053 |
WelFlash® NH 2 , 80 г, 10 шт./уп. |
00005-03063 |
WelFlash® NH 2 , 120 г, 10 шт./уп. |
| 00005-03075 |
WelFlash® NH 2 , 220 г, 6 шт./уп. |
00005-03084 |
WelFlash® NH 2 , 330 г, 4 шт./уп. |
Сферический силикагель 40-70 мкм
Номер детали |
Спецификация |
00001-04011 |
WelFlash® SiO 2 -1, 4 г, 20 шт./уп. |
00001-04021 |
WelFlash® SiO 2 -1, 12 г, 18 шт./уп. |
00001-04031 |
WelFlash® SiO 2 -1, 25 г, 12 шт./уп. |
00001-04042 |
WelFlash® SiO 2 -l, 40 г, 10 шт./уп. |
00001-04053 |
WelFlash® SiO 2 -1, 80 г, 10 шт./уп. |
00001-04063 |
WelFlash® SiO 2 -1, 120 г, 10 шт./уп. |
00001-04075 |
WelFlash® SiO 2 -1, 220 г, 6 шт./уп. |
00001-04084 |
WelFlash® SiO 2 -1, 330 г, 4 шт./уп. |
Сферический 40-70 мкм C18
Номер детали |
Спецификация |
00002-04011 |
WelFlash® C18-1, 4 г, 20 шт./уп. |
00002-04021 |
WelFlash® C18-1, 12 г, 18 шт./уп. |
00002-04031 |
WelFlash® C18-1, 25 г, 12 шт./уп. |
00002-04042 |
WelFlash® C18-1, 40 г, 10 шт./уп. |
00002-04053 |
WelFlash® C18-1, 80 г, 10 шт./уп. |
00002-04063 |
WelFlash® C18-1, 120 г, 10 шт./уп. |
00002-04075 |
WelFlash® C18-1, 220 г, 6 шт./уп. |
00002-04084 |
WelFlash® C18-1, 330 г, 4 шт./уп. |
Сферический CN 20-40 мкм
Номер детали |
Спецификация |
00004-03011 |
WelFlash® CN, 4 г, 20 шт./уп. |
00004-03021 |
WelFlash® CN, 12 г, 18 шт./уп. |
00004-03031 |
WelFlash® CN, 25 г, 12 шт./уп. |
00004-03042 |
WelFlash® CN, 40 г, 10 шт./уп. |
00004-03053 |
WelFlash® CN, 80 г, 10 шт./уп. |
00004-03063 |
WelFlash® CN, 120 г, 10 шт./уп. |
00004-03075 |
WelFlash® CN, 220 г, 6 шт./уп. |
00004-03084 |
WelFlash® CN, 330 г, 4 шт./уп. |
Сферический 20-40 мкм SAX
Номер детали |
Спецификация |
00007-03011 |
WelFlash® SAX, 4 г, 20 шт./уп. |
00007-03021 |
WelFlash® SAX, 12 г, 18 шт./уп. |
00007-03031 |
WelFlash® SAX, 25 г, 12 шт./уп. |
00007-03042 |
WelFlash® SAX, 40 г, 10 шт./уп. |
00007-03053 |
WelFlash® SAX, 80 г, 10 шт./уп. |
00007-03063 |
WelFlash® SAX, 120 г, 10 шт./уп. |
00007-03075 |
WelFlash® SAX, 220 г, 6± шт./уп. |
00007-03084 |
WelFlash® SAX, 330 г, 4 шт./уп. |