Различие ключевых понятий времени в хроматографическом анализе
Хроматография — широко используемый аналитический метод, включающий несколько ключевых временных концепций. Эти термины, включая время удерживания , скорректированное время удерживания , мёртвое время , относительное время удерживания и время задержки , играют различную роль в хроматографическом анализе.
Хотя все они выражаются через время, их значение существенно различается. Давайте рассмотрим эти концепции, чтобы лучше понять их применение и различия.
Время удерживания (RT, 𝑡 𝑅 )
Время удерживания — это время, прошедшее с момента ввода образца до появления вершины пика определённого компонента на хроматограмме. Этот показатель, обычно выражаемый в минутах (мин), имеет решающее значение для качественного анализа и идентификации целевых соединений.
Например, как показано на рисунке 1 ниже, компонент имеет время удерживания 10,0 мин .
Время хранения может варьироваться в зависимости от таких факторов, как:
- Концентрация и тип буферной соли в подвижной фазе
- pH и соотношение подвижной фазы
- Температура колонки
- Матричные эффекты
Эти небольшие изменения могут существенно повлиять на разделение соседних пиков, особенно при чувствительных анализах или сложных образцах.
В препаративной хроматографии время удерживания играет менее важную роль. Перегрузка, вызванная вводом больших объёмов образца, часто приводит к искажению пиков (например, размыванию или уширению пиков), что делает этот показатель ненадёжным в таких ситуациях.
Мертвое время ( 𝑡 0 )
Мёртвое время представляет собой время, необходимое для прохождения подвижной фазы (или неудерживаемых компонентов) через колонку. Это время удерживания компонентов, не взаимодействующих с неподвижной фазой. Например, как показано на рисунке 2 , мёртвое время составляет 1,4 мин .
Скорректированное время удерживания ( 𝑡′ 𝑅 )
Скорректированное время удерживания измеряет дополнительное время, которое компонент проводит в неподвижной фазе вследствие адсорбции или растворения. Оно рассчитывается по формуле:
t'R = tR - t0
На рисунке 2 скорректированное время удерживания компонента составляет 8,6 мин .
Относительное время удерживания (RRT)
Относительное время удерживания — это не единица времени, а отношение, используемое для сравнения времен удерживания различных компонентов относительно эталонного пика.
Хроматографические условия часто приводят к колебаниям времени удерживания. Чтобы предотвратить ошибочную идентификацию пиков во время анализа, выбирается референтный пик — обычно хорошо охарактеризованный или распространенный компонент. Отношение времени удерживания компонента к времени удерживания референтного пика остается постоянным, даже если времена удерживания варьируются, что повышает надежность идентификации пиков.
Время задержки
Время задержки — это время, необходимое для прохождения смеси растворителей от точки смешивания (обычно смесителя или дозирующего клапана в системе ВЭЖХ) до входа в колонку. Это время зависит от мёртвого объёма системы, включая смеситель и соединительные трубки, и также называется объёмом задержки или объёмом градиентной задержки .
Время задержки оказывает существенное влияние на точность и повторяемость в жидкостной хроматографии, особенно в условиях градиентного элюирования. Больший объём задержки увеличивает время, необходимое для достижения колонки сменой градиента, что может:
- Задержка пикового элюирования
- Вызвать уширение пика
- Снизить чувствительность и эффективность колонки
Различия в объеме задержки между приборами могут повлиять на воспроизводимость градиентных методов, потенциально изменяя разделение, время удерживания и переносимость метода.
Заключение
Понимание этих временных концепций необходимо для точной интерпретации хроматографических результатов и разработки надёжных методов. Правильное понимание и контроль этих факторов вносят значительный вклад в достижение надёжных и воспроизводимых аналитических результатов.