Очистка и пассивация жидкостной хроматографии
Введение
При загрязнении входных фильтров хроматографического насоса, входных/выходных клапанов и трубок (включая инжектор и ячейку детектирования) системы жидкостной хроматографии необходимо провести их очистку и пассивацию . Сначала следует выполнить очистку, а затем пассивацию.
Цель очистки — удалить загрязнения с трубок из нержавеющей стали и системы. Очистку необходимо завершить перед пассивацией. Пассивация направлена на формирование гладкого и равномерного оксидного слоя на внутренней поверхности трубок из нержавеющей стали.
Загрязнения внутри системы ВЭЖХ могут попадать в результате прикосновения оператора, воздействия лабораторной среды, отложений на деталях прибора, а также от подвижной фазы и образцов. Хотя система может самоочищаться подвижной фазой, некоторые высвобождающиеся примеси могут адсорбироваться жидкофазной системой, тем самым снижая общую производительность.
Итак, как обслуживать систему высокоэффективной жидкостной хроматографии? Давайте разберёмся.
Кислотная очистка жидкостной хроматографии
Обычно для очистки используется 30%-ный водный раствор фосфорной кислоты. Процедура очистки следующая:
- Снимите хроматографическую колонку и вместо нее используйте двухсторонний соединитель.
- Заполните головку насоса сверхчистой водой.
- Промойте 30% водным раствором фосфорной кислоты со скоростью потока 1 мл/мин в течение 1 часа (для UPLC уменьшите скорость потока и увеличьте время промывки).
- Переключитесь на сверхчистую воду и промывайте до тех пор, пока вода на выходе не станет иметь нейтральный pH.
- Перейдите на чистый метанол, чтобы смочить головку насоса и трубки, затем отложите для дальнейшего использования.
Пассивация жидкостной хроматографии
Цель пассивации
- Предотвращение коррозии: пассивирующий слой может предотвратить контакт металла с агрессивными средами, тем самым снижая скорость коррозии металла.
- Повышение долговечности: пассивационный слой может повысить долговечность и износостойкость металла, продлевая срок его службы.
- Улучшение формы пика: Взаимодействие ионов металлов с аналитами может привести к исчезновению или уширению хроматографических пиков. Это особенно заметно для веществ, содержащих фосфатные или карбоксильные группы. Пассивация в основном решает проблему размытия пиков, особенно полярных анионных аналитов, таких как аналиты с фосфатными функциональными группами, органические кислоты, гликозиды и биомолекулы (включая пептиды, белки, нуклеотиды и т. д.).
Специальная процедура пассивации
- Снимите хроматографическую колонку и с помощью штуцера подсоедините систему, заполнив головку насоса чистой водой.
- Пассивируйте 6М водным раствором азотной кислоты со скоростью потока 1 мл/мин в течение 1 часа (для UPLC уменьшите скорость потока и увеличьте время пассивации).
- Залейте чистую воду и промывайте до тех пор, пока уровень pH на выходе не станет нейтральным.
- Промойте систему чистым метанолом, смочите головку насоса и трубки, а затем подготовьте ее к дальнейшему использованию.
Если пассивация не решила проблему, устраните оставшиеся ионы металла
Существует два основных подхода: конкуренция с ионами металлов или устранение ионов металлов.
-
Стратегии конкуренции с ионами металлов:
- Добавьте в подвижную фазу ЭДТА, лимонную кислоту или метилендифосфоновую кислоту.
- Пропитайте трубку образцом матрицы.
- Пропитайте трубку высокой концентрацией аналита.
- Подкислите образец.
- Примечание: в системах масс-спектрометрии ЭДТА может вызывать подавление ионов, что приводит к снижению сигнала аналита и возможному образованию осадка на кончике распылительной иглы.
-
Стратегия устранения ионов металлов:
- Самый простой подход — заменить металлические трубки биосовместимыми компонентами прибора и колоночным оборудованием, например, колонками с алмазным покрытием, такими как колонки Welch DLC .