Спаситель диабета: человеческий инсулин и метод его анализа ВЭЖХ
Введение
Записи о диабете относятся к Древнему Египту (около 1500 г. до н. э.). Ещё чуть более века назад диабет часто приводил к летальному исходу. Инсулин является стандартным методом лечения диабета, а инъекции инсулина остаются одним из самых эффективных методов снижения уровня глюкозы.
Появление инсулина животного происхождения (инсулина первого поколения) спасло многих пациентов, однако инсулин, полученный от животных, содержал примеси, имел ограниченную чистоту, был дорогим и имел низкую производительность — всего этого было недостаточно для удовлетворения клинического спроса.
В 1980-х годах технология рекомбинантной ДНК позволила получить человеческий инсулин. Высокоочищенный человеческий инсулин позволил более точно контролировать уровень глюкозы в крови и быстро вытеснил животный инсулин. Будучи продуктом второго поколения, человеческий инсулин положил начало новой эре высокоочищенного синтетического инсулина.
Аналитический метод
Человеческий инсулин — водорастворимый макромолекулярный белок; его количественное определение проводится методом эксклюзионной хроматографии (ЭХ). ЭХ может быть подвержена размыванию пиков, ограниченной чувствительности и плохой воспроизводимости.
В данном случае колонка Welch Xtimate® SEC-120 продемонстрировала хорошие показатели для анализа инъекции человеческого инсулина.
Экспериментальные условия
- Колонка: Xtimate® SEC-120 (7,8×300 мм, 5 мкм)
- Подвижная фаза: А — буфер KH2PO4 (pH=3,0); Б — ацетонитрил (А:Б=80:20, об./об.)
- Скорость потока: 0,8 мл/мин
- Объем инъекции: 20 мкл/50 мкл
- Температура колонки: 40 °C
- Время элюирования: 20 мин.
- Детектор: УФ, 214 нм
| Аналит | Время отбывания | Площадь пика | Область % | Тарелки | Отслеживание. |
| Человеческий инсулин | 10.83 | 10145.0928 | 100 | 19001.55 | 1.59 |
| Аналит | Время отбывания | Площадь пика | Область % | Тарелки | Отслеживание. |
| Человеческий инсулин | 10.88 | 26374.3652 | 100 | 11186.34 | 2.88 |
Заключение
При использовании колонки Welch Xtimate® SEC-120 (7,8 × 300 мм, 5 мкм) в указанных выше условиях целевое соединение (человеческий инсулин) элюировалось со временем удерживания 10,9 мин. Повторные инъекции показали стабильное время удерживания; основной пик в пробах для инъекций был свободен от помех и имел приемлемую форму, удовлетворяющую аналитическим требованиям.