WI-CHA 80B, 500 г

Гель-фильтрационная хроматография

Принципы GFC

Гель-фильтрационная хроматография (ГФХ) разделяет биомолекулы на основе различий в размере и форме. Среда состоит из пористых частиц. Крупные молекулы не могут проникнуть во внутренние поры и быстро элюируются вместе с пустым объёмом, что приводит к сокращению времени удерживания. Молекулы меньшего размера проникают в поры и элюируются позже, поскольку проводят больше времени в матрице. Эффективность разделения зависит от выбора среды с размером пор, соответствующим молекулярной массе целевых веществ.

Выбор гелевой фильтрующей смолы в зависимости от цели разделения

• Групповое разделение
  Этот метод включает классификацию компонентов образца на группы с высокой и низкой молекулярной массой. Этот метод обычно используется для обессоливания и замены буфера. Пример: серия WD-G25.
• Тонкое разделение
  Это позволяет разделить компоненты с близкой молекулярной массой и используется на этапах аналитической или тонкой очистки. Пример: серии WA-FF и WA-GF.

Диапазон разделения гелевых фильтрационных сред (для глобулярных белков)

Ионообменная хроматография

Принципы МЭК

Ионообменная хроматография (ИЭХ) разделяет биомолекулы на основе различий в их изоэлектрических точках. При заданном pH разные биомолекулы несут разные типы и величины зарядов. Этот метод использует эти различия для разделения. В зависимости от типа функциональных групп ионообменная хроматография подразделяется на катионообменную и анионообменную.

Основные характеристики:

• Высокая управляемость
• Сильная селективность
• Высокая скорость восстановления
• Высокая грузоподъемность
• Возможность концентрации образца

Лиганды для IEC

Хроматография гидрофобного взаимодействия

Принципы HIC

Гидрофобная хроматография (ГХВ) разделяет вещества, используя взаимодействия между гидрофобными группами биомолекул и гидрофобными лигандами неподвижной фазы. Ионы солей разрушают гидратную оболочку вокруг биомолекул, способствуя взаимодействию с гидрофобными лигандами. К распространённым лигандам относятся бутилтиоэфирные, бутильные, октильные и фенильные группы.

Преимущества

• Загрузка образца в условиях высокой концентрации соли, элюирование в условиях низкой концентрации соли — хорошо совместимо с ионообменной хроматографией
• Сильная селективность
• Отличная физико-химическая стабильность

Факторы, влияющие на эффективность HIC

1. Тип и концентрация соли

Соли увеличивают поверхностное натяжение между белками и смолами, нарушая гидратационные слои и усиливая гидрофобные взаимодействия, тем самым способствуя связыванию белков с матрицей.

Соли оказывают различное влияние на гидрофобность. Сульфаты, такие как Na₂SO₄, K₂SO₄ и (NH₄)₂SO₄, усиливают гидрофобность, усиливая высаливающий эффект белков и поверхностное натяжение, тогда как MgCl₂, также усиливая поверхностное натяжение, увеличивает растворимость и, следовательно, снижает гидрофобность и препятствует связыванию белков.

Высокие концентрации соли усиливают гидрофобные взаимодействия. Концентрация соли, близкая к точке высаливания целевого белка, но ниже, оптимизирует связывание, не вызывая осаждения. Обычно раствора сульфата аммония с концентрацией 1 моль/л достаточно для связывания высокорастворимых белков со смолами.

2. рН

HIC обычно использует нейтральные фосфатные буферы. Хотя изменение pH имеет ограниченный эффект, более высокий pH может немного снизить гидрофобность белка. Коррекция pH редко используется для модуляции HIC.

3. Температура

Более высокие температуры усиливают гидрофобные взаимодействия, но могут снизить активность белка. Гидрофобную хроматографию следует проводить при стабильной температуре, чтобы избежать нежелательных эффектов.

Аффинная хроматография

Принципы аффинной хроматографии

Аффинная хроматография использует специфические и обратимые взаимодействия между биологическими молекулами, такими как антиген-антитело, фермент-субстрат, гормон-рецептор или комплементарные цепи ДНК, для достижения высокой чистоты разделения.

Преимущества аффинной хроматографии

• Быстро и эффективно
• Высокая селективность
• Достигает чистоты >90% за один этап очистки

Конструкции из смолы

1. Матрица
   Твердая подложка для иммобилизации лиганда, обычно агарозные или декстрановые гели
2. Распорный рычаг
   Линкер соответствующей длины, соединяющий матрицу с лигандом
3. Лиганд
   Молекула, способная специфически и обратимо связывать целевую биомолекулу

Пустые столбцы

Серия WK-EC 6.6/10

Колонки WK-EC серий 6.6 и 10 — это лабораторные пустые колонки, специально разработанные для хроматографии среднего и низкого давления. Они применимы для работы с биомолекулами, такими как рекомбинантные белки, антитела, вакцины и препараты крови, а также с малыми молекулами, такими как антибиотики, пептиды, синтетические лекарственные препараты и натуральные продукты. Эти колонки, совместимые с агарозными, декстрановыми и полимерными средами, изготовлены из высокоточного боросиликатного стекла и компонентов из ПЭЭК, что обеспечивает превосходную биосовместимость и химическую стойкость к большинству водных растворов.

Номинальное давление: WK-EC 6,6 – 35 бар; WK-EC 10 – 30 бар.

Серия WK-EC 16/26/50

Колонки серии WK-EC 16, 26 и 50 — это колонки низкого давления, предназначенные для разработки процессов как в области биомакромолекул (рекомбинантных белков, антител, вакцин, препаратов крови и т. д.), так и в области низкомолекулярных соединений (антибиотиков, пептидов, синтетических лекарственных препаратов, натуральных продуктов и т. д.). Они особенно подходят для сред на основе природных полисахаридов, таких как агароза и декстран. Все колонки этой серии рассчитаны на давление 5 бар.

Бренд: Висконсин

Режим разделения: Сродство

Базовый материал: фосфат кальция

Структура бусины:

Функциональная группа:

Спецификация: 500 г

Перекрестная ссылка: Керамический гидроксиапатитовый носитель Bio-rad CHT, тип II, 80 мкм , 500 г